透射電子體視顯微鏡及超薄切片
發(fā)布人：發(fā)布時(shí)間：2014/9/2
食用菌和其他微生物一樣，也適于使用體視顯微鏡電鏡進(jìn)行觀察研究。食用菌的抱子、子實(shí)體、菌絲體及其感病組織，包括病毒顆粒，都可采用電鏡，進(jìn)行超微檢驗(yàn)或深人探索。
超薄切片的基本程序及其原理和光學(xué)體視顯微鏡配套使用的石蠟切片頗為相似.也包括研究材料的固定，脫水，染色，透明，包埋，切片等步驟。不過，具體的試劑和方法需要和電鏡的性能相適應(yīng)。
首先，將實(shí)驗(yàn)材料切成小塊，裝人離心管內(nèi)，通過用蒸餾水?dāng)?shù)次離心洗滌，然后采用適宜的固定液予以固定備用。
一般是使用四氯化鋨固定液。它是一種比較貴重的藥物，有0.1g, 0.5g或lg安培瓶三種包裝。配制2%四抓化鍬溶液，先將棕色清潔的玻瓶，盛人5m1或25m1或50m1的蒸餾水。然后將四氯化鋨安培瓶洗凈，用玻璃刀鋸破，置于蒸餾水中，以玻璃棒擊破，搖蕩，置通風(fēng)櫥內(nèi)，并避免直接受光。不可放在冰箱內(nèi)，以免揮發(fā)出來的氣體影響其他物品。同時(shí)，須用玻瑞瓶儲存。因?yàn)樗艽┩杆芰掀?。在使用時(shí)，通常用磷酸緩沖液配制四氧化餓固定液。磷酸緩沖液的濃度為0.1mol/L，其pH常為7.0-7.4，加磷酸緩沖液所需要的濃度為1%或2%。由于鐵酸需要一些時(shí)間才能溶解，所以固定液最少要在使用前1天配制。在室溫下，固定液能夠保存數(shù)星期，最好將其密封，置于暗處。
脫水(基本上同石蠟切片)故從略。
包埋:包括滲透和整體包埋。滲透是使?jié)B透量滲透到細(xì)胞內(nèi)部，實(shí)際上是對細(xì)胞內(nèi)部的各細(xì)胞器或細(xì)胞物質(zhì)進(jìn)行內(nèi)部包埋，使細(xì)胞內(nèi)的精細(xì)結(jié)構(gòu)在切片時(shí)完整無損。而一般所說的包埋是將包埋劑使整體材料小塊包埋起來，內(nèi)外“接軌”，達(dá)到包埋的目的，為下一步超薄切片作好準(zhǔn)備。
電子體視顯微鏡常用的包埋劑主要有三種:環(huán)氧樹脂、聚脂樹脂、甲基苯烯酸醋。由于環(huán)氧樹脂具有較多優(yōu)點(diǎn)，故被廣泛采用。
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