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    一、實(shí)驗(yàn)器材

    1.菌種

    大腸桿菌和釀酒酵母的培養(yǎng)斜面。

    2.溶液和試劑

    無菌水，香柏油，二甲苯，吖啶橙和蒸餾水等。

    3.儀器和其他用品

    相差偏光顯微鏡，暗視野聚光器，熒光顯微鏡，合軸調(diào)節(jié)望遠(yuǎn)鏡，濾光片，載玻片和蓋玻片等。

    二、目的要求

    1.了解相差、暗視野及熒光顯微鏡的工作原理。

    2.學(xué)習(xí)并掌握使用上述3種偏光顯微鏡觀察微生物祥品的基本方法。

    三、基本原理

    使用普通明視野顯微鏡進(jìn)行微生物樣品的觀察時(shí)通常需要對樣品進(jìn)行染色處理，以提高反差。這是因?yàn)槊饕曇捌怙@微鏡的照明光線直接進(jìn)人視野，屬透射照明，透明的活菌在明視野中會(huì)由于和明亮的背景間反差過小而不易看清細(xì)節(jié)。本實(shí)驗(yàn)介紹的相差、暗視野及熒光顯微鏡，都是通過在成像原理上的改進(jìn)，提高了顯徽觀察時(shí)樣品的反差，可以實(shí)現(xiàn)對微生物活細(xì)胞的在接觀察。

    (一)相差顯微鏡

    在明視野下看起來透明的樣品如活細(xì)菌細(xì)胞，其不同部分的密度和折射率實(shí)際上是有差異的。光線通過這些樣品時(shí)，光波的相位因此發(fā)生變化.但這種相位變化不表現(xiàn)為明暗和顏色上的差異，不能為人眼所悠知。相差偏光顯微鏡到能通過其特殊裝置—環(huán)狀光闌和相板，將光的相位差轉(zhuǎn)變?yōu)槿搜劭梢圆煊X的振幅差(明暗差)。如果產(chǎn)生的干涉為相長干涉，則振幅的同相膠相加而變大(圖Ⅲ-9A)，該部分樣品的亮度加大;如果所產(chǎn)生的干涉為相消干涉(圖Ⅲ-9B),則振福的異相量相消而變小，這部分就變得較暗。這樣.變相位差為振幅差的結(jié)果，使原來透明的樣品會(huì)由于其內(nèi)部不同組分間光干涉現(xiàn)象的差異表現(xiàn)為明顯的明暗差異，對比度增加，能更加清晰地觀察到在普通光學(xué)偏光顯微鏡中看不到或看不清的活細(xì)胞及細(xì)胞內(nèi)的某些細(xì)微結(jié)構(gòu)。